ဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှု ပတ်ဝန်းကျင်သည် ဆဲလ်ထုတ်လုပ်မှုကို ထိခိုက်စေသည်။

ဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှု၏ အဓိကအားသာချက်များထဲမှတစ်ခုမှာ ဆဲလ်မျိုးပွားခြင်း၏ ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာဓာတုဗေဒကို ကိုင်တွယ်နိုင်စွမ်း (ဆိုလိုသည်မှာ အပူချိန်၊ pH၊ osmotic ဖိအား၊ O2 နှင့် CO2 တင်းမာမှု) နှင့် ဇီဝကမ္မပတ်ဝန်းကျင် (ဆိုလိုသည်မှာ ဟော်မုန်းနှင့် အာဟာရအာရုံစူးစိုက်မှု) တို့ဖြစ်သည်။အပူချိန်အပြင်၊ ယဉ်ကျေးမှုပတ်ဝန်းကျင်ကို ကြီးထွားမှုကြားခံက ထိန်းချုပ်ထားသည်။

ယဉ်ကျေးမှု၏ ဇီဝကမ္မပတ်ဝန်းကျင်သည် ၎င်း၏ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာနှင့် ဓာတုပတ်ဝန်းကျင်ကဲ့သို့ ရှင်းရှင်းလင်းလင်းမရှိသော်လည်း၊ သွေးရည်ကြည်အစိတ်အပိုင်းများကို ပိုမိုကောင်းမွန်စွာနားလည်ခြင်း၊ ကြီးထွားပြန့်ပွားမှုအတွက် လိုအပ်သောအချက်များကို ဖော်ထုတ်ခြင်းနှင့် ယဉ်ကျေးမှုရှိဆဲလ်များ၏ သေးငယ်သောပတ်ဝန်းကျင်ကို ပိုမိုကောင်းမွန်စွာနားလည်ခြင်း။(ဆိုလိုသည်မှာ ဆဲလ်-ဆဲလ် အပြန်အလှန်တုံ့ပြန်မှု၊ ဓာတ်ငွေ့ပျံ့နှံ့မှု၊ မက်ထရစ်နှင့် အပြန်အလှန်အကျိုးသက်ရောက်မှု) ယခုအခါ အချို့သောဆဲလ်လိုင်းများကို သွေးရည်ကြည်မပါသော မီဒီယာတွင် မွေးမြူခွင့်ပြုထားသည်။

1.Culture ပတ်၀န်းကျင်သည် ဆဲလ်များကြီးထွားမှုကို သက်ရောက်မှုရှိသည်။
ဆဲလ်အမျိုးအစားတစ်ခုစီအတွက် ဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှုအခြေအနေများ ကွဲပြားသည်ကို သတိပြုပါ။
ဆဲလ်အမျိုးအစားတစ်ခုအတွက် လိုအပ်သော ယဉ်ကျေးမှုအခြေအနေများမှ သွေဖည်သွားခြင်း၏ အကျိုးဆက်များသည် ပုံမှန်မဟုတ်သော phenotypes များကို ဖော်ပြခြင်းမှသည် ဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှု၏ ပြီးပြည့်စုံသော ကျရှုံးမှုအထိ ပါဝင်သည်။ထို့ကြောင့်၊ သင်စိတ်ဝင်စားသည့် ဆဲလ်လိုင်းနှင့် အကျွမ်းတဝင်ရှိရန်နှင့် သင့်စမ်းသပ်မှုတွင် သင်အသုံးပြုသည့် ထုတ်ကုန်တစ်ခုစီအတွက် ပေးထားသည့် ညွှန်ကြားချက်များကို တိကျစွာလိုက်နာရန် ကျွန်ုပ်တို့ အကြံပြုအပ်ပါသည်။

2. သင့်ဆဲလ်များအတွက် အကောင်းဆုံးဖြစ်အောင်ပြုလုပ်ထားသော ဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှုပတ်ဝန်းကျင် ဖန်တီးခြင်းအတွက် ကြိုတင်ကာကွယ်မှုများ-
ယဉ်ကျေးမှုမီဒီယာနှင့် သွေးရည်ကြည် (အသေးစိတ်အချက်အလက်များအတွက် အောက်တွင်ကြည့်ပါ)
pH နှင့် CO2 အဆင့်များ (အသေးစိတ်အချက်အလက်များအတွက် အောက်တွင်ကြည့်ပါ)
ပလပ်စတစ် စိုက်ပျိုးခြင်း (အသေးစိတ်အချက်အလက်များအတွက် အောက်တွင်ကြည့်ပါ)
အပူချိန် (အသေးစိတ်အချက်အလက်များအတွက် အောက်တွင်ကြည့်ပါ)

2.1 ယဉ်ကျေးမှုမီဒီယာနှင့် သွေးရည်ကြည်
ယဉ်ကျေးမှုအလတ်စားသည် ဆဲလ်ကြီးထွားမှုအတွက် လိုအပ်သော အာဟာရများ၊ ကြီးထွားမှုဆိုင်ရာအချက်များနှင့် ဟော်မုန်းများကို ပံ့ပိုးပေးသည့်အပြင် ယဉ်ကျေးမှု၏ pH နှင့် osmotic ဖိအားကို ထိန်းညှိပေးသောကြောင့် ယဉ်ကျေးမှုအလတ်စားသည် ယဉ်ကျေးမှုပတ်ဝန်းကျင်၏ အရေးကြီးဆုံးအစိတ်အပိုင်းဖြစ်သည်။

ကနဦးဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှုစမ်းသပ်မှုများကို တစ်သျှူးထုတ်ယူမှုများနှင့် ခန္ဓာကိုယ်အရည်များမှရရှိသော သဘာဝမီဒီယာကိုအသုံးပြု၍ လုပ်ဆောင်ခဲ့သော်လည်း စံချိန်စံညွှန်းသတ်မှတ်မှု၊ မီဒီယာအရည်အသွေးနှင့် တိုးမြှင့်တောင်းဆိုမှုများကြောင့် တိကျသေချာသောမီဒီယာကို ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်လာစေခဲ့သည်။အခြေခံမီဒီယာသုံးမျိုးမှာ basal media၊ လျှော့ချထားသော serum media နှင့် serum-free media ဖြစ်ပြီး ၎င်းတို့တွင် serum supplementation အတွက် မတူညီသောလိုအပ်ချက်များရှိသည်။

2.1.1 အခြေခံအလယ်အလတ်
Gibco ဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှုအလယ်အလတ်
ဆဲလ်လိုင်းအများစုသည် အမိုင်နိုအက်ဆစ်များ၊ ဗီတာမင်များ၊ အော်ဂဲနစ်ဆားများနှင့် ကာဗွန်အရင်းအမြစ်များ (ဂလူးကို့စ်ကဲ့သို့) ပါဝင်သော အခြေခံမီဒီယာတွင် ကောင်းစွာကြီးထွားသော်လည်း ယင်းအခြေခံမီဒီယာဖော်မြူလာများကို သွေးရည်ကြည်ဖြင့် ဖြည့်စွက်ရမည်ဖြစ်သည်။

2.1.2 သွေးရည်ကြည်အလယ်အလတ်ကို လျှော့ချပါ။
Gibco Low Serum Medium ပါတဲ့ ပုလင်း
ဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှုစမ်းသပ်မှုများတွင် သွေးရည်ကြည်၏ဆိုးကျိုးများကို လျှော့ချရန် နောက်ထပ်နည်းဗျူဟာတစ်ခုမှာ သွေးရည်ကြည်လျှော့ချထားသောမီဒီယာကို အသုံးပြုခြင်းဖြစ်သည်။လျှော့ချထားသော သွေးရည်ကြည်သည် အခြေခံအလတ်စားဖော်မြူလာတစ်ခုဖြစ်ပြီး အာဟာရဓာတ်များနှင့် တိရစ္ဆာန်မှရရှိသည့်အချက်များ ကြွယ်ဝသည့်အတွက် သွေးရည်ကြည်လိုအပ်သည့်ပမာဏကို လျှော့ချနိုင်သည်။

2.1.3 Serum-free ကြားခံ
Gibco serum-free ကြားခံဖြင့် ပုလင်း
Serum-free medium (SFM) သည် သင့်လျော်သောအာဟာရနှင့် ဟော်မုန်းဖော်မြူလာများဖြင့် သွေးရည်ကြည်ကို အစားထိုးခြင်းဖြင့် တိရိစ္ဆာန်သွေးရည်ကြည်အသုံးပြုမှုကို ရှောင်ရှားသည်။မူလယဉ်ကျေးမှုများနှင့် ဆဲလ်လိုင်းအများအပြားတွင် တရုတ် Hamster Ovary (CHO) ပြန်လည်ပေါင်းစည်းထားသော ပရိုတင်းထုတ်လုပ်မှုလိုင်း၊ အမျိုးမျိုးသော hybridoma ဆဲလ်လိုင်းများ၊ အင်းဆက်လိုင်းများ Sf9 နှင့် Sf21 (Spodoptera frugiperda) တို့အပြင် ဗိုင်းရပ်စ်ထုတ်လုပ်မှုအတွက် လက်ခံဆောင်ရွက်ပေးရန် အပါအဝင်၊ (ဥပမာ၊ 293၊ VERO၊ MDCK၊ MDBK) စသည်ဖြင့်၊ သွေးရည်ကြည်မပါသော ကြားခံကိရိယာကို အသုံးပြုခြင်း၏ အဓိက အားသာချက်တစ်ခုမှာ ကြီးထွားမှုဆိုင်ရာအချက်များ၏ ပေါင်းစပ်မှုကို ရွေးချယ်ခြင်းဖြင့် သင့်လျော်သော ဆဲလ်အမျိုးအစားများအတွက် ကြားခံရွေးချယ်နိုင်မှုဖြစ်သည်။အောက်ဖော်ပြပါဇယားတွင် သွေးရည်ကြည်မပါသော မီဒီယာများ၏ အားသာချက်များနှင့် အားနည်းချက်များကို ဖော်ပြထားပါသည်။

အားသာချက်
ကြည်လင်ပြတ်သားမှုကို တိုးစေသည်။
စွမ်းဆောင်ရည် ပိုကောင်းတယ်။
သန့်စင်ခြင်းနှင့် ရေအောက်ပိုင်း လုပ်ဆောင်ခြင်းတို့ကို ပိုမိုလွယ်ကူစေသည်။
ဆဲလ်လုပ်ဆောင်ချက်ကို တိကျစွာ အကဲဖြတ်ပါ။
ကုန်ထုတ်စွမ်းအားကို မြှင့်တင်ပါ။
ဇီဝကမ္မဆိုင်ရာ တုံ့ပြန်မှုများကို ပိုမိုကောင်းမွန်စွာ ထိန်းချုပ်နိုင်သည်။
အဆင့်မြှင့်ထားသော ဆဲလ်မီဒီယာကို ရှာဖွေခြင်း။
အားနည်းချက်
ဆဲလ်အမျိုးအစား တိကျသော အလတ်စားဖော်မြူလာ လိုအပ်ချက်များ
မြင့်မားသော သန့်စင်သော ဓာတ်ပစ္စည်းများ လိုအပ်ပါသည်။
ကြီးထွားမှုနှေးကွေးခြင်း။

2.2.1 pH အဆင့်
ပုံမှန်နို့တိုက်သတ္တဝါဆဲလ်လိုင်းအများစုသည် pH 7.4 တွင် ကောင်းမွန်စွာကြီးထွားကြပြီး မတူညီသောဆဲလ်လိုင်းများကြား ကွာခြားချက်များမှာ သေးငယ်သည်။သို့သော်၊ အချို့သောအသွင်ပြောင်းဆဲလ်လိုင်းများသည် အနည်းငယ်အက်ဆစ်ပတ်ဝန်းကျင် (pH 7.0 – 7.4) တွင် ပိုကောင်းလာကြောင်းပြသထားပြီး အချို့သောသာမန် fibroblast ဆဲလ်လိုင်းများသည် အနည်းငယ်အယ်ကာလိုင်းပတ်ဝန်းကျင် (pH 7.4 – 7.7) ကိုနှစ်သက်ကြသည်။Sf9 နှင့် Sf21 ကဲ့သို့သော အင်းဆက်ဆဲလ်လိုင်းများသည် pH 6.2 တွင် အကောင်းဆုံးကြီးထွားသည်။

2.2.2 CO2 အဆင့်
ကြီးထွားမှုကြားခံသည် ယဉ်ကျေးမှု၏ pH ကို ထိန်းချုပ်ပြီး pH ပြောင်းလဲမှုများကို တွန်းလှန်ရန် ယဉ်ကျေးမှုရှိဆဲလ်များကို ကြားခံပေးသည်။အများအားဖြင့်၊ ဤကြားခံအား အော်ဂဲနစ် (ဥပမာ၊ HEPES) သို့မဟုတ် CO2-bicarbonate-based buffers များပါ၀င်ခြင်းဖြင့် ရရှိသည်။ကြားခံ၏ pH သည် ပျော်ဝင်နေသော ကာဗွန်ဒိုင်အောက်ဆိုဒ် (CO2) နှင့် ဘိုင်ကာဗွန်နိတ် (HCO3-) အပေါ်တွင် မူတည်သောကြောင့်၊ လေထုအတွင်း CO2 ပြောင်းလဲမှုများသည် ကြားခံ၏ pH ကို ပြောင်းလဲသွားမည်ဖြစ်သည်။ထို့ကြောင့်၊ CO2-bicarbonate-based buffer ဖြင့် ခံနိုင်ရည်ရှိသော ကြားခံကို အသုံးပြုသောအခါ၊ အထူးသဖြင့် ပွင့်လင်းယဉ်ကျေးမှုဟင်းလျာများတွင် ဆဲလ်များကို မွေးမြူခြင်း သို့မဟုတ် မြင့်မားသောပြင်းအားများဖြင့် အသွင်ပြောင်းသောဆဲလ်လိုင်းများကို မွေးမြူသည့်အခါတွင် exogenous CO2 ကို အသုံးပြုရန် လိုအပ်ပါသည်။သုတေသီအများစုသည် လေထဲတွင် CO2 5-7% ကိုအသုံးပြုကြသော်လည်း၊ ဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှုစမ်းသပ်မှုအများစုသည် 4-10% CO2 ကိုအသုံးပြုကြသည်။သို့သော်၊ ကြားခံတစ်ခုစီတွင် မှန်ကန်သော pH နှင့် osmotic ဖိအားကိုရရှိရန် အကြံပြုထားသော CO2 တင်းမာမှုနှင့် bicarbonate အာရုံစူးစိုက်မှုရှိသည်။ပိုမိုသိရှိလိုပါက၊ အလယ်အလတ်ထုတ်လုပ်သူ၏ ညွှန်ကြားချက်များကို ဖတ်ရှုပါ။

၂.၃ ပလတ်စတစ်များ စိုက်ပျိုးခြင်း။
ဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှုဆိုင်ရာ ပလတ်စတစ်များကို ပုံစံအမျိုးမျိုး၊ အရွယ်အစားနှင့် မျက်နှာပြင်အမျိုးမျိုးဖြင့် ရရှိနိုင်ပါသည်။သင့်ဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှုအပလီကေးရှင်းအတွက် သင့်လျော်သောပလတ်စတစ်ကို ရွေးချယ်ရာတွင် အထောက်အကူဖြစ်စေရန် အောက်ဖော်ပြပါ ဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှု ပလတ်စတစ်မျက်နှာပြင်လမ်းညွှန်နှင့် ဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှုကွန်တိန်နာလမ်းညွှန်ကို အသုံးပြုပါ။
Thermo Scientific Nunc ဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှု ပလတ်စတစ်များအားလုံးကို ကြည့်ရန် (ကြော်ငြာလင့်ခ်)

2.4 အပူချိန်
ဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှုအတွက် အကောင်းဆုံးအပူချိန်သည် ဆဲလ်များကို သီးခြားခွဲထုတ်ထားသည့် အိမ်ရှင်၏ကိုယ်အပူချိန်ပေါ်တွင် အတိုင်းအတာတစ်ခုအထိ မူတည်ပြီး အပူချိန်တွင် ခန္ဓာဗေဒဆိုင်ရာ ပြောင်းလဲမှုများအပေါ် အနည်းအကျဉ်း (ဥပမာ၊ အရေပြားအပူချိန်သည် အရိုးစုကြွက်သားထက် နိမ့်နိုင်သည် )ဆဲလ်ယဉ်ကျေးမှုအတွက်၊ အပူလွန်ကဲခြင်းသည် အပူလွန်ကဲခြင်းထက် ပိုပြင်းထန်သော ပြဿနာဖြစ်သည်။ထို့ကြောင့်၊ incubator အတွင်းရှိ အပူချိန်သည် ပုံမှန်အားဖြင့် အကောင်းဆုံး အပူချိန်အောက် အနည်းငယ် သတ်မှတ်ပါသည်။

2.4.1 ဆဲလ်အမျိုးမျိုးအတွက် အကောင်းဆုံးအပူချိန်
လူသားနှင့် နို့တိုက်သတ္တဝါ ဆဲလ်လိုင်းအများစုကို အကောင်းဆုံးကြီးထွားရန်အတွက် ၃၆ ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်မှ ၃၇ ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင် ထိန်းသိမ်းထားသည်။
အကောင်းဆုံးကြီးထွားမှုအတွက် အင်းဆက်ဆဲလ်များကို 27°C တွင် စိုက်ပျိုးသည်။၎င်းတို့သည် အပူချိန်နိမ့်ပြီး အပူချိန် 27°C နှင့် 30°C ကြားတွင် ပို၍နှေးကွေးသည်။30°C အထက်တွင် အင်းဆက်ဆဲလ်များ၏ ရှင်သန်နိုင်စွမ်း လျော့နည်းသွားသော်လည်း 27°C သို့ ပြန်သွားပါက ဆဲလ်များ ပြန်လည်ကောင်းမွန်လာမည်မဟုတ်ပါ။
ကြက်ငှက်ဆဲလ်လိုင်းများသည် အမြင့်ဆုံးကြီးထွားရန် 38.5°C လိုအပ်သည်။ဤဆဲလ်များကို 37 ဒီဂရီစင်တီဂရိတ်တွင် သိမ်းဆည်းထားနိုင်သော်လည်း ၎င်းတို့သည် ပိုမိုကြီးထွားလာမည်ဖြစ်သည်။
သွေးအေးတိရိစ္ဆာန်များမှ ဆင်းသက်လာသော ဆဲလ်မျဥ်းများ (ဥပမာ- ကုန်းနေရေနေသတ္တဝါများ၊ ရေအေးငါးများ) သည် ကျယ်ပြန့်သော အပူချိန် 15°C မှ 26°C အထိ ခံနိုင်ရည်ရှိသည်။